Comentario: No se pierdan esta serie sobre el gluten, el veneno de nuestra sociedad, que la ciencia oficial se niega a explicarnos. Por tu salud y la de tus seres queridos, INFÓRMATE sobre los problemas de consumir gluten. Esta información es muy importante para los veganos que han sido engañados para creer que han encontrado la dieta definitiva.
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Las células dendríticas (CD) se encargan de presentar los antígenos y el reconocimiento de productos derivados de patógenos (como LPS) inicia el proceso de maduración, que puede ser modulado por estímulo inflamatorio o señales derivadas de las células T. Esta maduración produce cambios morfológicos, fenotípicos y funcionales, completándose al convertirse de células reconocedoras de antígenos a células maduras. Este proceso tiene ciertas características bien definidas: mayor expresión de CD40, CD80 y CD86, up-regulation de MHC, la pérdida de la capacidad de procesar antígenos y la producción de diversas citoquinas y quimioquinas. Las CD maduras estimulan una respuesta inmune al interactuar con los linfocitos T.

Palová-Jelínkova et al, realizaron un estudio utilizando péptidos de gliadina y CD (1). Encontraron cosas muy interesantes que describiré a continuación.

El estudio básicamente observó el efecto de los péptidos producidos por la digestión de la gliadina en humanos sobre las CD, con énfasis en la expresión de marcadores de maduración, producción de citoquinas y quimioquinas, y los cambios funcionales, así como la participación de NF-kB y varias MAPK.

Es importante tener en cuenta que se excluyó la presencia de LPS en las muestras y que las CD provenían de donantes sanos, no de pacientes con celiaquía. Los controles fueron proteína de soya y ovoalbúmina.

Efectos sobre marcadores de maduración en células dendríticas

Los resultados de la citometría de flujo se observan a continuación:
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Como se observa, los péptidos de gliadina estimularon la maduración de las CD juzgando por el incremento en los marcadores de maduración, CD83, CD80, CD86, CD40 y HLA-DR. El efecto fue dosis dependiente (se observó respuesta hasta con 1ug/ml). Luego de la exposición a 100ug/ml, la intensidad media de fluorescencia aumentó hasta en 9 veces para algunos marcadores (lo que indica una mayor presencia de marcadores de maduración). Por si fuera poco, el efecto estimulante producido por los péptidos de la gliadina a este nivel fue similar al inducido por 1ug/ml de LPS o 50ug/ml poli I:C. Conociendo el efecto que tiene la LPS sobre la respuesta inmune e implicancia dentro de casi todas las enfermedades crónicas modernas, esto es para preocuparse*. La proteína de soya no tuvo ningún efecto sobre la maduración de las CD, mientras que la OVA mostró una estimulación pequeña de CD86 cuando se utilizó la dosis mayor.
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Como se observa en la imagen comparativa, los efectos de la gliadina sobre los marcadores de maduración son comparables a los inducidos por LPS y poli I:C.

Producción de citoquinas y quimioquinas

Para observar los efectos sobre estas sustancias inflamatorias, se utilizó un microarray (RayBio Human Cytokine Ab Array III). Los puntos negros que son visibles claramente corresponden a los controles positivos y a IL-6, IL-8, MCP-1 y a la producción de oncogenes relacionados al crecimiento. Los puntos más suaves corresponden a citoquinas derivadas de macrófagos, TNF-a, RANTES y oncogen-a. MCP-2 y EGF tienen una baja intensidad.
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El panel A muestra el control (CD sin tratamiento). El panel B muestra la expresión de citoquinas y quimioquinas al exponer a las CD a los péptidos de gliadina. Como se observa, la expresión de citoquinas/quimioquinas es estimulada por los péptidos de gliadina. El panel C muestra la clave de citoquinas para las coordinadas de la izquierda.

Endocitosis por CD y capacidad aloestimulatoria

Durante el proceso de maduración, las CD pierden su actividad endocítica. Al exponer a las CD a los péptidos de gliadina, se observó un efecto nuevamente dosis dependiente sobre la endocitosis mediada por el receptor de manosa de FITC-dextrano, disminuyéndola a 84, 43 y 20% con dosis de 1, 10 y 100ug/ml, respectivamente. De igual manera, las CD expuestas a gliadina y LPS mostraron mayor capacidad aloestimulatoria (cocultivo con linfocitos TCD4 purificados y marcados con CFSE).

Efectos sobre la vía de NF-kB

Por medio del ensayo colorimétrico para NF-kB, se estimó la actividad de unión de NF-kB al DNA en extractos nucleares de CD expuestas a gliadina. Se observó un aumento de la unión de las subuinidades p50 y p65/Rel-A. El rol del complejo de NF-kB se confirmó utilizando TPCK, un inhibidor de la traslocación al núcleo (previene la degradación de IkB-a). La adición de TPCK también inhibió fuertemente la estimulación de CD83, CD80, CD86 y HLA-DR, así como la endocitosis y producción de TNF-a.
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Como se puede observar, cuando se añadió 25uM de TPCK, la unión de p50 y p65 estimulada por la gliadina disminuyó drásticamente, mostrando una menor densidad óptica a 450nm. De igual manera, la adición de TPCK produce una disminución de los valores de CD86, CD83, CD80 y HLA-DR, disminuyendo el % de intensidad de fluorescencia media, confirmando lo mostrado por el ensayo colorimétrico.
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Fosforilación de MAPK y relación con la maduración de las CD

Por Western Blot, se observó que la gliadina aumentó la fosforilación de ERK1/2, JNK1/2 y p38 MAPK. Utilizando inhibidores de la fosforilación específicos (U1026 para ERK, SP600125 para JNK) se inhibió la fosforilación inducida por la gliadina. En el caso de p38 MAPK, no se observó lo mismo con el inhibidor específico SB203580 (posiblemente por el sitio de unión a la quinasa). Interesantemente, SB203580 redujo el incremento estimulado por la gliadina de CD86, CD83 y CD80, y ligeramente la expresión de HLA-DR. Dentro de todos los inhibidores usados, globalmente, este fue el que tuvo mayor efecto sobre los marcadores de maduración y producción de citoquinas.

Conclusiones
  • La dosis de gliadina utilizada es similar a la concentración de gliadina esperada en el intestino luego de una comida con gluten y esta estimula la maduración de las CD.
  • Las CD estudiadas provenían de pacientes sin celiaquía.
  • El tratamiento de CD inmaduras con gliadina ocasionó un aumento de CD80, CD83, CD86 y HLA-DR (marcadores de presentación antigénica y maduración), así como una disminución de la actividad fagocítica.
  • La gliadina también estimuló la producción de citoquinas y quimioquinas inflamatorias.
  • Los efectos observados son similares a los efectos de LPS sobre las CD.
  • Dentro de la familia de MAPK estimuladas por la gliadina se encuentran ERK, JNK y p38 MAPK. Dentro de estas, la que parece juega un papel más importante dentro de los efectos mediados por la gliadina es p38 MAPK.
  • El tratamiento con gliadina produce un aumento de la unión de p50 y p65 al DNA.
  • No se conoce al receptor inducido por la gliadina, aunque se ha propuesto a TLR.
Mi comentario

El argumento en contra de la hipótesis de la gliadina (y el trigo) como desencadenante de enfermedades inflamatorias y autoinmunes es que solo hay un porcentaje muy bajo de personas con celiaquía. Sin embargo, como el presente estudio muestra, la respuesta de las células que comprenden el sistema inumne no difiere entre celíacos y sanos, por lo que existe una amplia gama de síntomas y potenciales problemas asociados al consumo de gluten (dosis-dependiente).

Como mencioné en el artículo anterior de la serie, los efectos negativos del gluten muchas veces no implican molestias gastrointestinales.

De acuerdo con esto, se ha observado que no hay diferencia en la respuesta de las células dendríticas a la gliadina entre pacientes con celiaquía, tratados o sin celiaquía (2). La única diferencia se observó en los pacientes con celiaquía activa, que mostraron mayor estimulación de células T que los otros grupos.

El mismo grupo de investigadores ha realizado estudios posteriores al revisado. En estos, han observado que los fragmentos de gliadina, especialmente el fragmento 31-43 de la alfa-gliadina, induce la migración de las células dendríticas, pre-requisito para el priming de los linfocitos T naive (3). Otro estudio mostró que la respuesta inflamatoria de los monocitos a la gliadina difería entre sujetos con celiaquía y sin celiaquía en la expresión de ciertas citoquinas, lo que podría explicar la aparición de síntomas en algunos y no en otros (4).

La maduración de las células dendríticas produce una disminución de la endocitosis y capacidad de procesar y presentar nuevos antígenos. Esto tiene grandes implicancias sobre el sistema inmune y la tolerancia a diferentes estímulos antigénicos tanto ambientales como dietéticos. Por este motivo, se ha propuesto que el gluten del trigo disminuye la tolerancia para la respuesta inmune del organismo (5).

En el próximo post hablaré de factores potenciadores de la toxicidad del gluten, para tratar de entender las respuestas individuales a diferentes concentraciones de gluten en la dieta.

*La implicancia y mecanismos de LPS merece un post completo.

Continuar a la cuarta y última parte